畜禽中土霉素、四環(huán)素、金霉素含量的測定

一.儀器

  液相色譜儀，紫外檢測器。

二.試劑

  土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.0100g（±0.0001g）土霉素，用0.1mol/L鹽酸溶液溶解，并定容至10.0mL ，即每毫升含土霉素1.0mg。

  四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.0100g四環(huán)素，用0.1mol/L鹽酸溶液溶解并定容至10.0mL ，即此溶液每毫升含四環(huán)素1.0mg。

  金霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.0100g金霉素，用蒸餾水溶解并定容至10.0mL ，即此溶液每毫升含金霉素1.0mg。  

  混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：取土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液、四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.0mL，取金霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0mL置于10.0mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四霉素各0.1mg、金霉素0.2mg，臨用時(shí)現(xiàn)配。

三.實(shí)驗(yàn)步驟

  1.樣品處理

  稱取5.00g(±0.01g)切碎的肉樣（＜5mm），置于50mL的錐形燒瓶中，加入5%高氯酸25.0mL于振蕩器上振蕩提取10min，移入離心管中，以2000r/min離心3min，取上清液經(jīng)4.5μm濾膜過濾，以此液進(jìn)行HPLC分析。

  2.液相分析參考條件  

  ① 色譜柱：ODS--C₁₈₍5_μm)，6.2mm×15cm。

  ② 流動(dòng)相：乙腈+0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液[用30%(體積分?jǐn)?shù))硝酸溶液調(diào)節(jié)pH至2.5][35:65(體積比)]。

  ③ 流速：1mL/min。

  ④ 檢測波長：355nm。

  ⑤ 進(jìn)樣量：10μL。

  3.樣品測定  

  吸取四、1.處理好的溶液10 μL，注入液相色譜儀，進(jìn)行HPLC分析，記錄峰高，從工作曲線上查的含量。

  4.工作曲線的制備

  稱取7分切碎的肉樣，每份5.00g，分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0μL，25μL，50μL，100μL，150μL，200μL，250μL，（）（）（含土霉素、四環(huán)素各為0.0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，15.0μg，20μg，25μg，含金霉素0.0μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，30.0μg，40.0μg，50.0μg），與樣品同樣操作。以峰高為縱坐標(biāo)，以抗生素含量為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線